DEVELOPMENT OF ENDOGENOUS ZEBRAFISH MACROPHAGE CRE-DRIVER LINE THROUGH CRISPR/CAS9 HOMOLOGY DIRECT TARGETING INTEGRATION. Masters thesis, King Fahd University of Petroleum and Minerals.

	PDF Muhammad Naeem (g201908410) 14-01-2023.pdf - Accepted Version Restricted to Repository staff only until 14 January 2024. Download (3MB)
	PDF Muhammad Naeem (g201908410) 14-01-2023.pdf - Accepted Version Restricted to Repository staff only until 14 January 2024. Download (3MB)
	PDF Muhammad Naeem (g201908410) 14-01-2023.pdf - Accepted Version Restricted to Repository staff only until 14 January 2024. Download (3MB)

Arabic Abstract

الاسم الكامل: محمد نعیم عنوان الرسالة: تطوير خط سائق الزرد الضخم الداخلي المنشأ من خلال تكامل الاستهداف المباشر لـ CRISPR / Cas9 التخصص: علوم الحياة تاريخ الدرجة العلمية: (نوفمبر) 2022 في الآونة الأخيرة ، ذكرت العديد من الدراسات أن خلايا البالعات الكبيرة (macrophages) ضرورية لتجديد القلب في أسماك الزرد, لكن لم يكن هناك أي خط cre يقود الي تعديل جيني في انسجة الخلايا البالعات الكبيرة لاسماك الزرد لفك تشفير الجينات الدقيقة والحديث الجزيئي المتبادل بين الخلايا البالعة الكبيرة لتجديد القلب. هنا لقد قمنا بتطوير خط creمحرض زماني مكاني مستقر من خلال الاستهداف المباشر للجين المتحور2A-cre recombinaseب كاسيت من الاذرع المتماثلة التي تتكون من 48 زوج من النيوكليوتيدات بواسطة CRISPR/cas9 في نهاية exon2 الخاص بجينmpeg1.1 في أسماك الزرد من أجل حصر التعبير الجيني ل جين ال recombinase داخل الخلايا البالعة الكبيرة فقط. ان التعبير الجيني لجين CreERT2 تم تصحيحه من خلال العبور مع Ubi: Switch EGFP: mCherry.النتائج أثبتت الاتي: التعبير الجيني ل CreERT2 recombinase يقوده المحفز الأصلي والعناصر التنظيمية الخاصة بالجين المستهدف. ان الجين القائد 2A-CreERT2 الخاص بالخلايا البالعة الكبيرة يمكن استخدامه في فك التشفير الدقيق للحديث ا لجزيئي المتبادل بين الخلايا البالعة الكبيرة وانقسام الخلايا القلبية وتجددها في اسماك الزرد

English Abstract

In recent, numerous studies reported that macrophages are crucial for cardiac regeneration in zebrafish. But there was not any Cre driver line for tissues specific gene editing macrophages of zebrafish to decode the exact genes and molecular crosstalk of macrophages for cardiac regeneration. Here in we have generated the stable spatiotemporal inducible CreERT2 driver line through CRISPR/Cas9 direct targeting of a 2A-Cre recombinase transgene with 48 bp homology arms cassette at the end of exon 2 of mpeg1.1 gene of zebrafish to restrict the recombinase expression specifically in the macrophage’s cells. The expression of CreERT2 was validated through Crossing with Ubi: Switch LoxP- EGFP-LoxP:mCherry. The findings demonstrate that the CreERT2 recombinase expression is led by the native promoter and regulatory elements of the targeted genes. This 2A-CreERT2 macrophage-specific driver could be employed further to exact decoding the macrophage molecular crosstalk with cardiomyocyte proliferation and regeneration after cardiac injury in zebrafish.

Item Type:	Thesis (Masters)
Subjects:	Engineering General
Department:	College of Chemicals and Materials > Bioengineering
Committee Advisor:	Khalil, Amjad
Committee Co-Advisor:	Lai, Ben
Committee Members:	Nzila, Alexis and Ahmad, Irshad and Al Thaqfi, Jameel
Depositing User:	MUHAMMAD NAEEM (g201908410)
Date Deposited:	15 Jan 2023 07:33
Last Modified:	15 Jan 2023 07:33
URI:	http://eprints.kfupm.edu.sa/id/eprint/142318